液相色譜分析柱使用性非常高，與此同時(shí)遇到的問(wèn)題也會(huì)很多，不熟悉的客戶常常不知所措，小編根據(jù)經(jīng)驗(yàn)總結(jié)了常見(jiàn)的問(wèn)題及解答，希望可以幫助到客戶。

　　1、測(cè)定多肽，一般采用什么液相色譜分析柱?流動(dòng)相是乙腈和水，還有微量的TFA。特別是像類似三肽的短肽，應(yīng)該怎么選擇液相色譜分析柱?

　　答：分子量不高的多肽一般選用常規(guī)C18柱就能測(cè)定，也有用離子交換柱、水性C18柱和Hilic親水作用柱的。

　　2、氨基柱在進(jìn)酸性樣品時(shí)，很傷液相色譜分析柱，如使用一段時(shí)間后，柱效降低，峰形改變，如何恢復(fù)?

　　答：氨基柱測(cè)酸性樣品，應(yīng)該是用氨基柱的HILIC模式。酸的存在可能會(huì)使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化，導(dǎo)致使用一段時(shí)間后對(duì)于某些類的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降。建議：用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱(沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動(dòng)相洗去多余氨)，之后再進(jìn)行分析這類酸性分析物時(shí)建議在流動(dòng)相中略微添加少許氨如0.1%。

　　3、液相色譜分析柱的技術(shù)都有哪些?比如封尾等，這些技術(shù)在應(yīng)用時(shí)都體現(xiàn)在哪里?

　　答：色譜柱技術(shù)包括填料技術(shù)和裝柱技術(shù)，填料技術(shù)自不待言，填料的好壞對(duì)色譜柱分離性能和選擇性有決定性影響。裝柱技術(shù)也沒(méi)有想象中的這么簡(jiǎn)單，不同固定相、不同粒徑、不同柱管內(nèi)徑和長(zhǎng)度，裝柱工藝都有所不同，要裝出緊密、穩(wěn)定、均一的柱床，更多是一門(mén)藝術(shù)，需要經(jīng)驗(yàn)積累。

　　國(guó)內(nèi)和國(guó)外想比，我認(rèn)為色譜柱的差距在于：國(guó)內(nèi)公司以前都不會(huì)自己開(kāi)發(fā)填料，一般買(mǎi)國(guó)外現(xiàn)成填料裝柱，買(mǎi)到的填料質(zhì)量控制權(quán)不在自己手里。另外因?yàn)檠b柱歷史短，經(jīng)驗(yàn)積累少，裝柱工藝也沒(méi)有*達(dá)到國(guó)外水平。另外，對(duì)色譜柱性能很關(guān)鍵的基礎(chǔ)材料-----裸硅膠，國(guó)產(chǎn)的還不過(guò)關(guān)，在純度、粒徑和孔徑的均一性方面和國(guó)外產(chǎn)品相比，差距很大。

　　4、液相色譜分析柱在什么情況下可以清洗一下篩板呢?原來(lái)也討論過(guò)這個(gè)問(wèn)題，我也拆下來(lái)清洗過(guò)，但我看到柱前段的污染更甚，于是就用刀片刮了刮，然后把清洗好的篩板安裝上去。問(wèn)題解決了，但使用壽命會(huì)不會(huì)減少呢?

　　答：液相色譜分析柱柱頭污染了，就取出污染的，再裝一些填料。因?yàn)榧尤肽愎瘟诵┨盍希敲次⒂^的塔板數(shù)就少了。假入你刮得不多，僅表面，可能就是一些臟物，所以問(wèn)題解決。但是今后還會(huì)有同樣問(wèn)題，再掛，那么不小心刮，影響柱效。建議還是裝一個(gè)預(yù)柱。

　　5、如果液相色譜分析柱取下來(lái)放置一段時(shí)間，需要做什么保護(hù)嗎?

　　答：對(duì)一般的反相柱，也就是洗干凈后放到純甲醇(乙腈)或者是80%左右的甲醇(乙腈)水中，然后用堵頭塞緊柱兩頭，以免保存溶劑揮發(fā)，應(yīng)該不需要做特殊的保護(hù)。

　　6、網(wǎng)上對(duì)液相色譜分析柱是否可以反沖一直有爭(zhēng)論，那什么樣的柱子可以反沖，什么不可以。反沖后是正者用，還是反著用。具體到各型號(hào)柱子不僅是ODS柱，其他如正向柱、氨基柱、離子交換柱等都有解釋。

　　答：一般的正相反相柱應(yīng)該都能反沖，只有兩端篩板孔徑不對(duì)稱的柱子不能反沖，不過(guò)目前這樣的柱子已經(jīng)比較少見(jiàn)了。反沖是為了把柱頭的污染物沖洗掉，反沖后還是正著用比較好，以免柱子的兩頭都被污染。我們一直提倡的是：正向使用，反向沖洗。

　　7、流動(dòng)相中加入適量的*可以改善峰形的機(jī)理是什么?

　　答：《液相色譜方法及應(yīng)用》于世林編著的上面說(shuō)：甲醇為質(zhì)子給予體、乙腈為質(zhì)子接受體、*是偶極溶劑，應(yīng)該除了極性影響，還有另外的影響因素，至于分離機(jī)理，還是比較復(fù)雜的，不能看成是個(gè)方法。

　　8、預(yù)柱或保護(hù)柱用還是不用的問(wèn)題!原來(lái)分析中藥品種時(shí)，我一直都是用保護(hù)柱。但來(lái)到新公司后，發(fā)現(xiàn)大家都沒(méi)有使用，幾個(gè)實(shí)驗(yàn)室連保護(hù)柱都沒(méi)找到一個(gè)，也就是說(shuō)大家從來(lái)都沒(méi)有用過(guò)。后來(lái)問(wèn)一個(gè)老員工，說(shuō)是有可能影響藥品分析。我就想問(wèn)：安裝保護(hù)柱后會(huì)影響樣品分析嗎?我們做的大多是頭孢類的抗生素。

　　答：應(yīng)該這樣說(shuō)，加上保護(hù)柱，肯定有利于保護(hù)色譜柱不受一些顆粒物質(zhì)的堵塞，肯定有害于分離度和柱效，因?yàn)楸Ｗo(hù)柱中間有著死體積的存在。但是如果保護(hù)柱接得好，并且盡量控制其匹配性和經(jīng)常更換，分離度和柱效應(yīng)該影響并不大。

　　頭孢類的抗生素也要看到底是原料藥還是制劑嘍，有些原料藥，可以根據(jù)液相色譜分析柱的損耗選擇添加預(yù)柱(中間是個(gè)篩板)，制劑的話，如果有輔料嚴(yán)重干擾或者流動(dòng)相鹽分比較大，那還是配個(gè)保護(hù)柱。