上海高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相) 內(nèi)， 由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)， 在兩相中作相對運(yùn)動時， 經(jīng)過反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過程， 各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別， 被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出， 通過檢測器時， 樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜 形式打印出來。
1、過濾流動相，根據(jù)需要選擇不同的濾膜。
2、對抽濾后的流動相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。
3、打開HPLC工作站，連接好流動相管道，連接檢測系統(tǒng)。
4、進(jìn)入HPLC控制界面主菜單，點(diǎn)擊manual，進(jìn)入手動菜單。
5、有一段時間沒用，或者換了新的流動相，需要先沖洗泵和進(jìn)樣閥。沖洗泵，直接在泵的出水口，用針頭抽取。沖洗進(jìn)樣閥，需要在manual菜單下，先點(diǎn)擊purge，再點(diǎn)擊start，沖洗時速度不要超過10ml/min。
6、調(diào)節(jié)流量，初次使用新的流動相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過2000。點(diǎn)擊injure，選用合適的流速，點(diǎn)擊on，走基線，觀察基線的情況。
7、設(shè)計(jì)走樣方法。點(diǎn)擊file，選取se-lectusersandmethods，可以選取現(xiàn)有的各種走樣方法。若需建立一個新的方法，點(diǎn)擊newmethod。選取需要的配件，包括進(jìn)樣閥，泵，檢測器等，根據(jù)需要而不同。選完后，點(diǎn)擊protocol。一個完整的走樣方法需要包括：a、進(jìn)樣前的穩(wěn)流，一般2-5分鐘；b、基線歸零；c、進(jìn)樣閥的loading-inject轉(zhuǎn)換；d、走樣時間，隨不同的樣品而不同。
8、進(jìn)樣和進(jìn)樣后操作。選定走樣方法，點(diǎn)擊start。進(jìn)樣，所有的樣品均需過濾。方法走完后，點(diǎn)擊postrun，可記錄數(shù)據(jù)和做標(biāo)記等。全部樣品走完后，再用上面的方法走一段基線，洗掉剩余物。
9、關(guān)機(jī)時，先關(guān)計(jì)算機(jī)，再關(guān)液相色譜。
注意事項(xiàng)：
1、流動相均需色譜純度，水用20M的去離子水。脫氣后的流動相要小心振動盡量不引起氣泡。
2、柱子是非常脆弱的，*做的方法，先不要讓液體過柱子。
3、所有過柱子的液體均需嚴(yán)格的過濾。
4、壓力不能太大，至好不要超過2000psi。
